Harold Rowe Holbrook, Jr. (17. února 1925) se narodil v Clevelandu, Ohio, otci Haroldovi Roweovi Holbrookovi a matce Aileen Davenportové, estrádní tanečnici. Holbrook vystudoval Culverovu akademii a Denisonovu Universitu, kde vedl významný projekt o Marku Twainovi, který ho přivedl k rozvoji one-man show, pro kterou je nejvíce známý. Tyto série představení nazýval „Mark Twain Tonight“ (za které získal obě ocenění Tony a Drama Desk).
Holbrook sloužil v americké armádě a ve druhé světové válce byl umístěný v Newfoundlandu, kde rovněž účinkoval v divadle. Ministerstvo zahraničí ho dokonce poslalo (1957-1959) na evropské turné, které zahrnovalo i vystoupení za tehdejší železnou oponou.
Roku 1956 si ho všiml Ed Sullivan (televizní moderátor) v jeho „Twain show“ a dal Holbrookovi příležitost vystoupit ve své národní show. V roce 1967 byla show „Mark Twain Tonight“ vysílána na televizi CBS a Xerox a Holbrook za svůj výkon získal cenu Emmy. K jeho televizním rolím patří i Abraham Lincoln ze seriálu LINCOLN (1976).
Holbrook se objevil v nejméně šesti filmech, v jejichž součástí je spiknutí: MAGNUM FORCE (1973), KOZOROH 1 (1978), SOUDCOVA NOC (1983), FLETCH ŽIJE (1989), VŠICHNI PREZIDENTOVI MUŽI (1976) a FIRMA (1993).