Nathan Lane je predovšetkým významným divadelným hercom, na Broadwayi slávil úspech v hrách Noëla Cowarda - Present Laughter (nominácia na cenu Drama Desk Award), Lawrenca Edwarda Watkina - On Borrowed Time (s Georgem C. Scottem), Neila Simona - Smích v 23. poschodí, Terenca McNallyho - Love! Valour! Compassion! (ceny Drama Desk Award a Obie) a v muzikálových komediách Franka Loessera - Chlapi a ženské (Drama Desk a nominácia na cenu Tony) a Larryho Gelbarta - V Ríme na pľaci bola zábava (ceny Tony 1996 a Drama Desk Award 1996). S hrou Neila Simona - Broadway Bound obišiel celú Ameriku.
Neil Simon ho obsadil do svojej hry The Odd Coule, ktorá mala premiéru 27. októbra 2005. Jeho rola Maxa Bialystocka mu vyniesla ocenenia Drama Desk, Outer Critics Circle a Tony Award v kategórii najlepší herec v muzikále. Za výkon, ktorý podal behom uvedenia tejto hry v Londýne, dostal cenu Olivier Award. Taktiež napísal scenár a zahral si v adaptácii hry The Frogs.
Mimo rad daľších ocenení získal v roku 1992 cenu Obie za dlhoročné vynikajúce výkony na mimobroadwayských scénách, kde sa predstavil napríklad v Shakespearových komédiach Sen noci svätojánskej, Pôžička za oplátku a Veselé pani z Windsdoru. Tiež dostal a skvelo sa ujal jednej z hlavných postáv v komediálnom TV seriáli One of the Boys (1982) a titulnej roli v seriáli George and Martha (1999).
Ako hosť sa objavil napríklad v seriáloch The Days and Nights of Molly Dodd, Miami Vice, Frasier (nominácia na cenu Emmy), Mad About You. Na filmovom plátne na seba po prvý krát upozornil úlohou homosexuálneho suseda hlavnej hrdinky (Michelle Pfeiffer) v prepise divadelnej hry Terenca McNallyho Frankie a Johnny.